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MS培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)操作程序

日期:2025-04-30 03:39
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摘要:MS培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)操作程序 由于組培的植物不同,需要配制不同的培養(yǎng)基,為減少工件量,可把藥品配成濃縮液。有些微量元素和有機(jī)成分成分濃度極低,因此,先配制成母液的母液。

MS培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)操作程序

實(shí)驗(yàn)步驟

1  MS培養(yǎng)基母液的母液的配制
       由于組培的植物不同,需要配制不同的培養(yǎng)基,為減少工件量,可把藥品配成濃縮液。有些微量元素和有機(jī)成分成分濃度極低,因此,先配制成母液的母液。建議濃度如下表: 

 

藥品名稱

配制的終濃度

配制50ml的總質(zhì)量(g)

煙酸

0.01g/ml

0.5

VB6

0.1g/ml

5

甘氨酸

0.2g/ml

10

NaMoO4.2H2O

0.05g/ml

2.5

CuSO4.5H2O

0.05g/ml

2.5

KI

0.1g/ml

5

H3BO3

0.062g/ml

3.1

MnSO4. H2O

0.169g/ml

8.45

ZnSO4. 7H2O

0.172g/ml

8.6

CoCl.6H2O

0.05g/ml

2.5

VB1

0.1g/ml

5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

        母液的母液的配制過(guò)程:

        (1)根據(jù)表中的濃度,稱取50ml體積的藥品的質(zhì)量。

        (2)加入到相應(yīng)的溶液中,定容至50ml。

        (3) 放入密封50ml塑膠管中,-20℃保存。

2  MS培養(yǎng)基母液濃度表:

        (1)MS-A(macro):為工作液濃度的50倍
 

NH4NO3

41.25g/500ml

 KNO3

47.5g/500ml

MgSO4·7H2O

9.25g/500ml

KH2PO4

9.25g/500ml

        (2)MS-B(micro):為工作液濃度的100倍
     

H3BO3

0.124g/200ml

MnSO4·4H2O

0.338g/200ml

ZnSO4·7H2O

0.172g/200ml

CuSO4·5H2O

0.0005g/200ml

CoCl2·6H2O

0.0005g/200ml

KI

0.0166g/200ml

Na2MoO4·2H2O

0.005g/200ml

        (3) MS-C:為工作液濃度的100倍

CaCl2·2H2O

22.0g/500ml

        (4) MS-D:為工作液濃度的100倍

煙酸

0.01g/200ml

VB6

0.01g/200ml

VB1

0.002g/200ml

甘氨酸

0.04g/200ml

 

 

 

        (5)MS-E:為工作液濃度的100倍

Na2-EDTA

3.725g/500m

FeSO4·7H2O

2.875g/500m

 

 

 

3  母液的配制

    MS-A:稱取NH4NO3  41.25g、KNO3 47.5g、MgSO4·7H2O 9.25g、KH2PO4 9.25g, 蒸餾水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。

    MS-B:吸取母液的母液如下,蒸餾水定容至200ml。4℃的冰箱中保存。

 

母液的母液量

母液終濃度

H3BO3

 

0.124g/200ml

MnSO4·4H2O

 

0.338g/200ml

ZnSO4·7H2O

 

0.172g/200ml

CuSO4·5H2O

 

0.0005g/200ml

CoCl2·6H2O

 

0.0005g/200ml

KI

 

0.0166g/200ml

Na2MoO4·2H2O

 

0.005g/200ml


    MS-C:稱取CaCl2·2H2O 22.0g蒸餾水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。

    MS-D:吸取母液的母液如下,蒸餾水定容至200ml。4℃的冰箱中保存.

 

母液的母液量

母液終濃度

煙酸

 

0.01g/200ml

VB6

 

0.01g/200ml

VB1

 

0.002g/200ml

甘氨酸

 

0.04g/200ml

 

 



  
    MS-E:稱取Na2-EDTA 3.725g 、FeSO4·7H2O 2.875g蒸餾水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中避光保存。


4  MS培養(yǎng)基基本工作液的配制

     MS培養(yǎng)基基本工作液質(zhì)量表

組成成分

數(shù)量(mg/l)

組成成分

數(shù)量(mg/l)

NH4NO3

1650

Na2-EDTA

37.3

KNO3

1900

FeSO4·7H2O

27.8

CaCl2·2H2O

440

CuSO4·5H2O

0.025

MgSO4·7H2O

370

蔗糖

30

KH2PO4

170

肌醇

100.0

KI

0.83

煙酸

0.5

H3BO3

6.2

鹽酸吡哆醇

0.5

MnSO4·4H2O

22.3

甘氨酸

2.0

ZnSO4·7H2O

8.6

鹽酸硫銨等

0.4

Na2MoO4·2H2O

0.25

 

 

CoCl2·6H2O

0.025

pH

5.8


    (1)配制1升工作液,燒杯中放入700ml左右的蒸餾水,按順序分別吸取MS-A母液20ml、MS-B母液10ml、MS-C母液10ml、MS-D母液10ml、MS-E母液10ml。

    (2)加入固體蔗糖30g(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)節(jié)濃度),溶解。

    (3) 加入所需的**。定容至1000ml。

    (4)0.1-1mol/l的HCl或NaOH調(diào)整pH值。

    (5)如果配制固體培養(yǎng)基加入一定濃度的瓊脂。瓊脂濃度為10%~15%。

    (6) 液體培養(yǎng)基可選擇高溫高壓**和過(guò)濾**2種方法。固體培養(yǎng)基采用高溫高壓**方法。倒入三角瓶等培養(yǎng)器皿中,封口**。

    (7)工作液配制的注意事項(xiàng):

           由于培養(yǎng)基內(nèi)有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),極利**和**繁殖,造成污染,影響組培的成功,一般有高溫高壓**和過(guò)濾**兩種方法。

           高溫高壓**: 一般用**鍋**,注意**鍋不能裝的過(guò)滿,鍋內(nèi)保持1.1Kg/cm2的壓力,溫度120℃左右,大約15-20分鐘即可。

           過(guò)濾**: 一些易受高溫破壞的培養(yǎng)基成分如IAA、IBA、ZT等,不宜用高溫高壓法**,可用過(guò)濾**,可過(guò)濾**后再加入已高溫高壓**的培養(yǎng)基中,過(guò)濾**應(yīng)在無(wú)菌室或超凈工件臺(tái)上進(jìn)行,以避免污染培養(yǎng)基。

滬公網(wǎng)安備 31011702004399號(hào)

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