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方陣滴定確定*佳條件時,為什么選擇OD值在1.0左右

日期:2025-04-29 15:31
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摘要: 方陣滴定確定*佳條件時,為什么選擇OD值在1.0左右 一般現在酶標儀OD*大測到3左右,所以只要不高于這個就可以,保險起見,可選擇2.0左右OD區間大,ELISA的工作濃度范圍也自然大點. 個人覺得棋盤ELISA一定要選擇OD1.0的點是個誤區。首先不同型號的靈敏度應該是不一樣的;其次OD為1.0指的是某個抗原抗體濃度條件下的OD值,并不代表通過此次棋盤得到的*佳抗原抗體的濃度所做的各種后續ELISA實驗的值也是1.0左右,所以說選擇處于酶標儀靈敏度的*佳狀況并不一定符合后續的實驗。(不善表達,不知自己描述清楚沒有)...

方陣滴定確定*佳條件時,為什么選擇OD值在1.0左右

一般現在酶標儀OD*大測到3左右,所以只要不高于這個就可以,保險起見,可選擇2.0左右OD區間大,ELISA的工作濃度范圍也自然大點.

個人覺得棋盤ELISA一定要選擇OD1.0的點是個誤區。首先不同型號的靈敏度應該是不一樣的;其次OD為1.0指的是某個抗原抗體濃度條件下的OD值,并不代表通過此次棋盤得到的*佳抗原抗體的濃度所做的各種后續ELISA實驗的值也是1.0左右,所以說選擇處于酶標儀靈敏度的*佳狀況并不一定符合后續的實驗。(不善表達,不知自己描述清楚沒有)

我自己覺得要根據不同的實驗類型(間接,雙抗夾心或是競爭等)來選擇*佳抗原抗體工作濃度。象競爭ELISA,做棋盤的目的是包被抗原和一抗的量,試想如果包被抗原太濃,意味著需要競爭抗原濃度也不能小(畢竟是競爭對手不能懸殊太大),這就注定了競爭ELISA的檢測限不好(因為競爭抗原往往是要檢測的東西,所需濃度越大IC50也就越大)。而一抗也不能足量,否則即能與包被抗原反應又能與檢測抗原反應,就不能稱為競爭ELISA了。也不能太少,否則整體OD讀數太低。

雙抗夾心ELISA也是同樣的道理,找到包被抗體和酶標抗體的平衡點,即能OD與本底之間的平衡點。

滬公網安備 31011702004399號

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