96T       僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

雞血管生成素1(ANGPT1)ELISA試劑盒

本試劑盒運用雙抗體夾心ELISA法定量測定雞血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清液和其他生物液體中雞血管生成素1(ANGPT1)含量。

 檢測范圍

0.781-50 ng/mL

 *低檢測限

0.23 ng/mL

 實驗原理

將雞血管生成素1(ANGPT1)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的雞血管生成素1(ANGPT1)與連接于固相載體上的抗體結合，然后加入生物素化的雞血管生成素1(ANGPT1)抗體，將未結合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標記的親和素，再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞血管生成素1(ANGPT1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值)，計算樣品濃度。

 試劑盒內容

雞血管生成素1(ANGPT1)ELISA試劑盒需自備的設備及試劑

1.         450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預熱)

2.         單道或多道微量加液器及吸頭

3.         稀釋樣品的EP管

4.         蒸餾水或去離子水

5.         吸水紙

6.         盛放洗液的容器

 試劑盒的儲存及有效期

1.         未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

2.         使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

注意：

試劑盒內酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在**實驗后 1個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準，保質期內所有組分都確保是穩定的。

雞血管生成素1(ANGPT1)ELISA試劑盒標本的采集與保存

1.         血清：

將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4^oC 過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20^oC 或-80^oC 保存，但應避免反復凍融。

2.         血漿：

用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的 30 分鐘內于 2-8^oC 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20^oC 或-80^oC 保存，但應避免反復凍融。

3. 組織勻漿：

1） 取適量組織塊，于預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2） 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行（有條件實驗室可選用機器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融 進一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復凍融法可重復2 次）。

3） 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測。

4. 細胞裂解液：

1）貼壁細胞需要先用胰酶消化，離心收集細胞（懸浮細胞可直接離心收集）；

2）將收集到的細胞用冷PBS 洗3 次；

3）物理方法裂解細胞（可先超聲破碎細胞，再反復凍融）：

i 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂。

ii 反復凍融：將待破碎的細胞在-20 ^oC 以下冰凍，室溫融解，反復3 次，使細胞溶脹破碎。

4）將標本于2-8 ^oC 1500×g 離心10 分鐘，收集上清備用。

5. 細胞培養上清或其它生物標本：

請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20^oC 或-80^oC 保存，但應避免反復凍融。

注意：

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