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小鼠腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體檢測試劑盒之后我又用單抗包被，結果一樣：陰性、空白值好高。

1.包被：將三種單抗混合，1：1000，1:2000,1:4000......1:128000稀釋，做三個平行，4°過夜。

2.**天洗滌4次，每次3min，拍干。5%脫脂乳封閉，37°，2h。

3.洗滌4次，每次3min，拍干。加抗原（為純化好的原核表達蛋白）稀釋濃度為2微克/ml，同時設陰性對照（胎牛血清1：100稀釋），小鼠腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體檢測試劑盒空白對照（PBS溶液)。37°，1h。

4.洗滌4次，每次3min，拍干。加酶標抗體（1:1000稀釋），37°，1h。

5.洗滌4次，每次3min，拍干。加TMB顯色，每孔100微升。37°，10min。

6.2M硫酸終止，

7.OD450讀數。

小鼠腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體檢測試劑盒結果，陽性值2.5，陰性對照和空白值很高可達到1.5。之后我又用細胞上清包被，其他和上面一樣，加酶標抗體（1:1000稀釋），封閉用的是1%明膠和2%的BSA，2%的BSA封閉：陰性值1.8，陽性和空白值都在2.0以上。1%明膠封閉：陰性值1.0，陽性和空白值都在2.0以上。

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