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做ELISA試劑盒試驗標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意

日期:2025-07-02 22:30
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摘要: 做ELISA試劑盒試驗標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意 標準曲線如何繪制?實驗室技術部分享,由于老師們對繪制標準曲線有一定的異議,我司特別推出技術指導專題討論會,對于老師們所繪制的標準曲線,標準曲線有什么問題作出一一解答。對此技術總工對以下問題作出詳細說明: 提出做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意 1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結果無從談起。 2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大...

做ELISA試劑盒試驗標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意 

 標準曲線如何繪制?實驗室技術部分享,由于老師們對繪制標準曲線有一定的異議,我司特別推出技術指導專題討論會,對于老師們所繪制的標準曲線,標準曲線有什么問題作出一一解答。對此技術總工對以下問題作出詳細說明: 
 提出做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意
1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結果無從談起。
2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內,包括上 限和下限。而對于呈S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度*陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內。
3、*好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。
4、檢測標準樣品時,應按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
5、標準曲線的樣品數一般為7個點,但至少要保證有5個點。
6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動,但一般來說,相關系數R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是 0.999.
總結選擇什么方程去擬合
用于**檢測的所謂“標準曲線”其實稱為擬合曲線比較合適。**檢測時標準點(可以是倍比稀釋的,也可以不是)濃度如果和相應的吸光度(OD)值如 果能夠呈現直線關系當然是*理想的了,這時可以通過EXELL等方便的獲得擬合曲線,進而推算出樣品的濃度值。但我們做**檢測很少有時候能夠有這么理想 的情況,標品濃度和相應OD值往往是"S"型的曲線關系,這時就不能用直線擬合的方式了,而對擬合方法進行選擇就是必要的了。
關于標準曲線的擬合方式,直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用于ELISA及其它生物學反應中的曲線擬合,但都只適用于曲線的一部分, 有的適用于前半段,有的適用于后半段,有的適用于中間一段,而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的適用性。當然,如果用于定量,還是在中間一段 較好。這些方法雖然沒有一種方法可以通用,但也都可以用。關鍵在于你的標準曲線做到了S形的哪一部分,你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部分。在S曲線的低 濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合,中低濃度部分可以用直線方程,中間部分可用對數方程,而中后段可用四參數。
目前國際上*流行的**檢測擬合方式是“四參數邏輯擬合”,用這種擬合方式往往能夠比較**的反映濃度和吸光度的曲線關系,從而進一步比較正確的獲 得樣品中待測物質的濃度值。
其實,在一個長的區間內,Logistic應該都能擬合得較為理想。但并不是說它就是萬能的。事實上不僅是ELISA,其它很多生物學反應都是S形 曲線,也都可以用Logistic曲線擬合。但建模型是一回事,而用它來定量是另一回事。如果用來定量,S形曲線的中間段(較陡處)是比較好的,而兩端的 平坦部分計算誤差會大,有時甚至會很大。
國內外的定量試劑盒往往嚴格規定了較窄的使用濃度范圍,實際上是一種偷懶得做法,為了避免叫你選擇不同類型的標準公式。 


滬公網安備 31011702004399號

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