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酵母菌落直接質粒轉化法

日期:2025-07-02 22:27
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摘要: 酵母菌落直接質粒轉化法 1.用牙簽從平板中挑取單菌落(直徑2~3mm),轉移到1.5ml的無菌離心管中。 2.將10μl載體DNA(100μg)與10μl轉化質粒DNA混合,振蕩均勻。(若轉化DNA是用未經RNA酶處理的“mini-prepDNA”方法制得,則不需加載體DNA)。 3.加0.5mlPLATE溶液,振蕩。 PLATE溶液: 40%聚乙二醇(PEG,分子量3350;SigmaP3640) 0.1mol/L醋酸鋰 10mmol/LTris-HCl(pH7.5) 1mmol/LEDTA 4.置于實驗臺上,室溫培養4天。 5.置42℃下熱激15...

酵母菌落直接質粒轉化法

1.用牙簽從平板中挑取單菌落(直徑2~3mm),轉移到1.5ml的無菌離心管中。

2.將10μl載體DNA(100μg)與10μl轉化質粒DNA混合,振蕩均勻。(若轉化DNA是用未經RNA酶處理的“mini-prepDNA”方法制得,則不需加載體DNA)。

3.加0.5mlPLATE溶液,振蕩。

PLATE溶液:

40%聚乙二醇(PEG,分子量3350;SigmaP3640)

0.1mol/L醋酸鋰

10mmol/LTris-HCl(pH7.5)

1mmol/LEDTA

4.置于實驗臺上,室溫培養4天。

5.置42℃下熱激15分鐘。

6.以8000~10000r/min離心10秒沉淀細胞,小心棄去上清液,將細胞輕輕懸浮到200μl無菌蒸餾水,使細胞懸浮均勻,再直接將混合液涂選擇平板。

滬公網安備 31011702004399號

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